Tartalom
- Mi a genotípus és a fenotípus?
- A HIV genotipizálásának magyarázata
- A HIV-fenotipizálás magyarázata
- Mikor végeznek genetikai ellenállástesztet?
A kezelés sikertelensége esetén alternatív gyógyszerkombinációkat kell választani a rezisztens vírus új populációjának elnyomása érdekében. Genetikai ellenállás tesztelése elősegíti ezt azáltal, hogy azonosítja a rezisztens mutációk típusait egy személy "víruskészletében", miközben meggyőződik arról, hogy ezek a vírusok mennyire érzékenyek a lehetséges antiretrovirális szerekre.
Két elsődleges eszközt használnak a HIV genetikai rezisztenciájának tesztelésére: a HIV genotípusos vizsgálat és a HIV fenotípusos vizsgálat.
Mi a genotípus és a fenotípus?
Definíció szerint a genotípus egyszerűen egy szervezet genetikai felépítése, míg a fenotípus az adott szervezet megfigyelhető jellemzői vagy tulajdonságai.
A genotípusos vizsgálatok (vagy genotipizálás) úgy működnek, hogy azonosítják az öröklött utasításokat egy sejt genetikai kódolásán vagy DNS-en belül. A fenotípusos vizsgálatok (vagy fenotipizálás) megerősítik ezen utasítások expresszióját különböző környezeti feltételek hatására.
Noha a genotípus és a fenotípus közötti összefüggés nem abszolút, a genotipizálás gyakran előre jelezheti a fenotípust, különösen akkor, ha a genetikai kód változásai a tulajdonságok vagy jellemzők várható változásához vezetnek, mint például a gyógyszerrezisztencia kialakulása esetén.
A fenotipizálás viszont megerősíti az "itt és most" kifejezést. Célja egy szervezet reakciójának értékelése a környezeti nyomás specifikus változásaira, például amikor a HIV különböző gyógyszereknek és / vagy gyógyszerkoncentrációknak van kitéve.
A HIV genotipizálásának magyarázata
A rezisztencia tesztelésére általában a HIV genotipizálása a leggyakoribb technológia. A vizsgálat célja specifikus genetikai mutációk kimutatása a gag-pol a vírus régiója ” genom (vagy genetikai kód). Ez az a régió, ahol a reverz transzkriptáz, a proteáz és az integráz enzimek - a legtöbb antiretrovirális gyógyszer célpontjai - kódolódnak a DNS-láncban.
A laboratóriumi szakemberek a HIV-genom polimeráz láncreakció (PCR) technológiával történő első amplifikálásával különféle mutációs detektálási technológiák segítségével szekvenálhatják (vagy "leképezhetik") a vírus genetikáját.
Ezeket a mutációkat (vagy mutációk felhalmozódását) technikusok értelmezik, akik elemzik az azonosított mutációk és a vírus várható antiretrovirális gyógyszerek iránti érzékenysége közötti kapcsolatot. Az online adatbázisok segíthetnek a teszt szekvenciájának összehasonlításában a "vad típusú" vírus prototípusának (azaz a rezisztens mutációkat nem tartalmazó HIV-nek).
Ezeknek a teszteknek az értelmezését használják a gyógyszer érzékenységének meghatározására, a kulcsmutációk nagyobb száma a magasabb szintű gyógyszerrezisztenciát eredményezi.
A HIV-fenotipizálás magyarázata
A HIV-fenotipizálás felméri az ember HIV-növekedését egy gyógyszer jelenlétében, majd összehasonlítja ezt egy kontroll, vad típusú vírus növekedésével ugyanabban a gyógyszerben.
A genotípusos vizsgálatokhoz hasonlóan a fenotípusos tesztek is felerősítik a HIV genom gag-pol régióját. A genetikai kód ezen szakaszát ezután vad típusú klónra "oltják" rekombináns DNS technológia. A kapott rekombináns vírust az emlős sejtek in vitro megfertőzésére használják (laboratóriumban).
A vírusmintát ezután a különböző antiretrovirális gyógyszerek növekvő koncentrációinak teszik ki, amíg a vírus szuppressziója 50% -ig és 90% -ig el nem éri. A koncentrációkat ezután összehasonlítjuk a kontroll, vad típusú minta eredményeivel.
A relatív "hajtás" változások adják meg azt az értéktartományt, amely alapján meghatározzák a gyógyszer érzékenységét. A négyszeres változás egyszerűen azt jelenti, hogy a vírus szuppressziójának eléréséhez négyszeres mennyiségű gyógyszerre volt szükség a vad típushoz képest. Minél nagyobb a szeres érték, annál kevésbé érzékeny a vírus egy adott gyógyszerre.
Ezeket az értékeket ezután az alsó klinikai és a felső klinikai tartományba helyezik, a felső értékek pedig magasabb szintű gyógyszerrezisztenciát eredményeznek.
Mikor végeznek genetikai ellenállástesztet?
Az Egyesült Államokban hagyományosan genetikai rezisztencia tesztet végeznek a kezelés előtt még nem kezelt betegeknél annak megállapítására, hogy van-e valamilyen "megszerzett" gyógyszerrezisztenciájuk. Az Egyesült Államokban végzett vizsgálatok azt sugallják, hogy az átvitt vírus 6–16% -a lesz rezisztens legalább egy antiretrovirális gyógyszerrel szemben, míg közel 5% -a több gyógyszercsoportra is rezisztens.
Genetikai rezisztencia tesztet is alkalmaznak, ha a gyógyszeres rezisztenciát gyanítják a terápiában részesülő egyéneknél. A vizsgálatot addig végezzük, amíg a beteg vagy a sikertelen kezelési rendet alkalmazza, vagy a kezelés abbahagyását követő négy héten belül, ha a vírusterhelés meghaladja az 500 kópiát / ml-t. Ezekben az esetekben általában előnyös a genotípusos vizsgálat, mivel ezek kevesebbe kerülnek, gyorsabb az átfutási idő, és nagyobb érzékenységet kínálnak a vad típusú és rezisztens vírus keverékeinek kimutatására.
A fenotípusos és a genotípusos tesztelés kombinációját általában előnyben részesítik azoknál a személyeknél, akiknek komplex, több gyógyszerrel szembeni rezisztenciája van, különösen azok számára, akik proteáz inhibitorokkal vannak kitéve.